常用荧光染料各自的优点及选择方案推荐

本文摘要：随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物在生物实验中也得到了广泛的应用。目前市面上的抗体和蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);Alexafluror?系列(···

　　随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物在生物实验中也得到了广泛的应用。目前市面上的抗体和蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);Alexafluror?系列(Lifechnogy,USA);Dylight系列;Cy系列;IR系列等。*常用的是Alexaflur?系列和CFTM系列。

　　一.与AlexaFluor相比，CFTM系列染料的核心对比?该系列具有以下优点：

　　1.罗丹明新型核心。

　　罗丹明染料以出色的耐光性和良好的荧光量子产量被称为。因此，许多亚丹明?染料有罗丹明的核心结构，但传统罗丹明的化学结构很难从长波长的荧光染料延伸到远红外区域，甚至更具挑战性的近红外区域，生物偶联后的水溶性并不理想。Biotium科学家发现了一种新型的罗丹明染料的化学方法，从绿色到近红外多色荧光。该方法有效地应用于CF染料，特别是远红外CF染料的产品，通过该方法制备的染料不仅具有良好的水溶性和耐光性。

　　2.近红外染料特异性高。

　　近红外线染料的较大特性是比可见光范围大很多，大滴的染料通常会造成染料水溶性低.染料聚合物多.荧光量子产量差等难题。以便处理这种难题，很多商业用途的近红外线染料例如Alexaflur?.Dylught?Dyes和IRDyes?近红外线染料，在配制时吸附了很多的带负电的磺化基团，其磺化能够在一定水平上能够提升染料的溶解性和荧光性，但那样也产生了一些较为比较严重的难题，经这类染料标志的生物耦合体的非特异组成。Biotium的科学研究家采用革命性的方式设计方案近红外线染料CF，在防止引入很多负电荷的状况下，巨大的确保染料出色的物理化学特性。Biotium近红外线CF染料以花绿或罗丹明染料构造为中心构造，该中心构造的独特化学装饰限制了染料的分子位移，进而得到染料的大量生产率和优良的水溶性。因此，近红外线CF染料的荧光强度高于其他近红外染料，且光线稳定性良好。*重要的是，与其他商业近红外染料制备的抗体偶联物相比，近红外CF染料的蛋白样品在免疫印记实验中的应用**化了信噪比。

　　3.标记效率优异。

　　生物偶联后的活性染料一般非常容易水解，会在运输、实际操作和存储中产生许多不便，*后致染料组合高效率低。像亚尔塔克斯州?dyes，dyles?dyes?dyesirdyes?等比较严重的磺化性能有很强的吸湿性，加剧水解等难题。全Biotisum的CF染料具备相对性平稳的胺活性的SE基团型，这比大部分Alexafluor染料的ses更为耐水解。一般来说，CF染料se商品始终给出更高的标示高效率，出示给客户更强的使用价值。

　　二.方案的选择：

　　1.蓝色(激发在350-450nm处)

　　AMCA等-亮蓝和紫外线激发的CF350.ALexaFluor350;

　　CF350是一种蓝色荧光染料，类似于Alexafluor350和传统荧光染料AMCA。CF350的荧光强度高于AMCA，蛋白质上的荧光强度超过50%，水溶性更好，耐光性更好，更容易与现有的绿色荧光基团区分开来;

　　近乎完美匹配蓝色二极管激光器的CF405S/CF405M。

　　2.绿色(激发488nm处)

　　针对48nm氩气激光的绿色荧光染料，如CF488A.A.Alexaflur488.FAM.DyLight488.Cy2等;

　　适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞计;流式细胞计的FL1通道检测;或可用于荧光显微技术;

　　CF488A在红色通道溢流量小于AlexaFluor488的**带电量减少与抗体耦合物的非特异性组合;耐光性好;水溶性好，PH值不敏感;稳定性好，活性染料标记率高。

　　在较宽的PH值范围内(PH4~10)AlexaFluor488保持稳定;

　　缺陷荧光强度易受PH值影响，当PH值下降时，其荧光强度会减弱。

　　3.橙红色(激发543-555n5m)

　　与543nm橙色荧光染料相匹配的CF543.Alexafluror546.ATTO550,Cy3,Dylight549,RITC;

　　匹配Cy3滤光片的橙色荧光染料，如CF555.Alexaflur555.Tetramethylrhodine等;

　　4.红色(激发在568-594nm处)

　　568nm红色荧光染料，如CF568.AlexaFlur?568，ATTO565，Redminer等;

　　与AlexaFluor568标记的抗体亮度相比，CF568染料耐光性能好;

　　594.Alexaflur?594，ATTO?594，DyLight?*亮的红色荧光染料，如594，TexasRed;

　　CF594比Alexafluor594明亮2~4倍，这是由于其高量子产量和优异的水溶性。与此同时，CF594对光非常稳定，因此可以理想地应用于严格条件下的应用，如共聚焦显微镜和单分子显像。

　　5.远红外线(激发在620-660nm处)

　　等620nm处的CF620R.LightCyclerRed640;

　　6333/635nm激光线**染料，如CF633.Alexaflusor633，Alexaflusor647，Cy5，DyLight633，DyLight649等;

　　CF633染料的优点：当63nm氦氖激光或635nm红色二极管激光刺激时，产生*亮的抗体耦合物;光稳定性远高于AlexaFlur647;水溶性高。

　　远红外荧光染料，如CF640、ATTO647N、Cy5、DyLight649等;

　　远红外荧光染料，如CF647.AlexaFlur647，ATTO647N，DyLight649;

　　CF647与Cy5.AlexaFluor647相比，以花青素为基础的远红外荧光染料更亮。

　　CF660.Alexafluror?介于远红外和近红外之间的荧光染料，如660、Allophycocyanin(APC);

　　6.近红外线(680-790nm处激发)

　　近红外荧光染料，如CF680R/680.AlexaFlur680.Cy5.5;

　　CF680是一种基于花青素的高水溶性染料，分子量约为3000。该染料具有优良的标记抗体，在免疫染色光谱相似的染料中发出*明亮的荧光和产生**的信噪比。

　　近红外荧光染料，如CF750.CF770

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