流式细胞术偶联抗体荧光素有哪些？常用流式荧光素表

本文摘要：在基础生物医学研究和临床诊断中，荧光信号是流式细胞仪接收处理的重要信号，荧光技术的应用使流式细胞技术发生质的飞跃。通过分析荧光信号的强度，可以间接反映样品细胞的某些特征，因为流式细胞仪接收到的荧光信号···

　　在基础生物医学研究和临床诊断中，荧光信号是流式细胞仪接收处理的重要信号，荧光技术的应用使流式细胞技术发生质的飞跃。

　　通过分析荧光信号的强度，可以间接反映样品细胞的某些特征，因为流式细胞仪接收到的荧光信号来自于结合在样品细胞上的荧光素，荧光素偶联抗体或荧光染料与细胞结合，使细胞具有相应的荧光素。

　　荧光素

　　荧光素(fluorochroome)主要是一种天然、半天然和合成的化学试剂;还有一些是蛋白质。当荧光素不受刺激时，外部电子处于基态。当受到特定波长的激光器刺激时，外部电子接收到足够的能量时，它会转移到刺激状态。在刺激状态下，荧光素的外部电子不稳定，这将自发地从刺激状态恢复到基态，并释放特定波长的荧光器。这就是荧光素产生荧光的原理。

　　由于不同的荧光素具有特定的刺激和发射光，因此不同波长荧光的荧光素可以在流分析中同时标记。不同的荧光通道接收激发荧光素后发射的这些荧光素，它们之间的信号收集和分析不会相互干扰，因此有可能进行多种荧光通道分析。

　　流式细胞术发展到现在，流式分析中使用了许多荧光素。

　　一般荧光素

　　常用荧光素在流式细胞手术中总结到下表。

　　羟基荧光素醋酸盐瑰珀酰亚胺脂CFSE全称;

　　注：该表不包含AlexaFluor系列和QD系列荧光素。

　　FITC是流式细胞*常用的荧光素，荧光素比较稳定，与FITC偶联的流式抗体种类*多。FITC是由*常用的48nm激光器激发出来的，其发射的荧光信号被**个荧光通道(FL1)接收。FITC偶联的抗体体通常用于流式细胞的单色分析。PE荧光素也被广泛使用，这也是由48nm激光器激发出来的。荧光通道FL2通常接收发射的荧光信号，其荧光信号强烈，适用于抗原分子分析的弱表达。FITC和PE荧光素通常用于流式细胞的双色分析。

　　一般情况下，单个激光器的流式细胞仪配备488nm激光器，可以同时进行三色分析，也就是说，有三个荧光通道，FL1接收FITC的荧光信号，FL2接收PE的荧光信号，FL3可以接收Percp或PE-Cy5的荧光信号。由于Percp和PE-Cy5的荧光信号通过同一荧光通道接收，这两种荧光素偶联的抗体在流式分析时不能同时使用。

　　APC也是较为常见的荧光素，其荧光信号也很强，一样适用弱表述的抗原蛋白分子的剖析，但它不可以被488nm激光器激发，只是被635nm激光器激发，因此488nm单激光器的流式细胞仪不可以剖析APC的荧光信号。假如流式细胞仪同时配有635nm激光器，就能够应用APC荧光素。例如BD企业的LSRⅡ析流式细胞仪，能够另外开展4色剖析，FL4接纳的是APC的光信号。

　　不经常使用PE-Txred、PE-Cy7和APC-Cy7荧光素，通常只能在9通道或12通道等荧光通道较多的流式细胞计上使用。

　　CFSE和PKHI26荧光素可以与细胞膜和细胞中的蛋白质非特异性结合使用，而不是与抗体偶联用，而是单独使用。PKH26可以嵌入细胞膜的双分子层，用于细胞痕迹和细胞增殖检测。

　　(E)CFP，(E)GFP和(E)YFP是指示蛋白质，其中(E)GFP是*常用的，通常集成在基因组中，用于指示转基因的所有细胞或特定细胞的非特异性指示;(E)CFP和(B)YFP是一对理想的荧光素，可振能量，可以用来检测蛋白质和蛋白质的直接结合。

　　活细胞可标记Hoechst3312，多用于分选侧群干细胞。

　　PI荧光素可以用来检测细胞的DNA含量，也可以用来区分活细胞和死细胞。

　　7-在需要明确区分活细胞和死细胞时，使用AAD标记死细胞。

　　TMRE对线粒体膜电位敏感，膜电位降低时结合力降低，细胞调度通常伴有线粒体膜电位降低，因此TMRE可通过指示细胞调度线粒体膜电位变化来检测。

　　主要用于DNA自动测序，FAM在水中稳定，也可用于PCR产物定量和核酸探头等。

　　化学荧光钙离子指示剂Fluo4是细胞内*常用的钙离子水平流式检测。

　　SNARF-AM对细胞内pH值敏感，可用于细胞内pH值的流式检测，被48nm激光器刺激后，可发出640nm和575nm左右的两种荧光，两种荧光信号强度的比值与细胞内pH值的比值有一定的关系。

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