常用抗体标记荧光染料的选择方案

本文摘要：随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物在生物实验中也得到了广泛的应用。目前市面上的抗体和蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);Alexafluror?系列(···

　　随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物在生物实验中也得到了广泛的应用。目前市面上的抗体和蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);Alexafluror?系列(Lifechnogy,USA);Dylight系列;Cy系列;IR系列等。*常用的是Alexaflur?系列和CFTM系列。

　　一.与AlexaFluor相比，CFTM系列染料的核心对比?该系列具有以下优点：

　　1.罗丹明新型核心。

　　罗丹明染料以其优异的耐光性和良好的荧光量子产量被称为。所以很多亚历克斯特夫球?罗丹明的染料具有罗丹明的核心结构，但传统罗丹明的化学结构很难从长波长的荧光染料延伸到红外区域，甚至更具挑战性的近红外区域，生物偶联后的水溶性也不理想。

　　Biotium科学家发现了罗丹明染料的一种新型化学方法，从绿色到近红外荧光。这种方法在CF染料的产品中得到了有效的应用，特别是远红外CF染料，这种方法制备的染料不仅具有极好的水溶性和耐光性。

　　2.近红外染料特异性高。

　　近红外线染料**的特点是比可见光范围大得多，大量的染料往往会导致染料水溶性染料聚合物多.荧光量子产量差等问题。

　　为了解决这些问题，许多商业近红外染料，如Alexaflur?.dyles?dyes和irdyes?近红外染料，在制备过程中吸附了大量带有负电的磺化基团，其磺化作用可在一定程度上提高染料的溶解性和荧光性，但通过这种染料标记的生物耦合物的非特异性组合，也带来了其他更严重的问题。

　　Biotium的科学家们通过革命性的方法设计了近红外染料CF，这极大地保证了染料的优良物理和化学特性，同时避免了大量负电的引入。Biotium近红外CF染料以花绿或罗丹明染料为核心结构，特殊的化学装饰限制了染料的分子内部位移，从而获得较高的染料量子生产率和较好的水溶性。

　　因此，近红外线CF染料的荧光强度高于其他近红外染料，且光线稳定性良好。*重要的是，与其他商业近红外染料制备的抗体偶联物相比，近红外CF染料的蛋白样品在免疫印记实验中的应用**化了信噪比。

　　3.标记效率优异。

　　生物偶联后的活性染料一般非常容易水解，会在运输、实际操作和存储中产生许多不便，*后致染料组合高效率低。像亚尔塔克斯州?dyes，dyles?dyes?dyesirdyes?等比较严重的磺化性能有很强的吸湿性，加剧水解等难题。全Biotisum的CF染料具备相对性平稳的胺活性的SE基团型，这比大部分Alexafluor染料的ses更为耐水解。一般来说，CF染料se商品始终给出更高的标示高效率，出示给客户更强的使用价值。

　　二.方案的选择：

　　1.蓝色(激发在350-450nm处)

　　-亮蓝和紫外线激发，如CF350.AMCA。

　　CF350是一种蓝色荧光染料，类似于Alexafluor350和传统的荧光染料AMCA。CF350的荧光强度高于AMCA，蛋白质上的荧光强度超过50%，水溶性更好，耐光性更好，更容易与现有的绿色荧光基团区分开来;

　　近乎完美匹配蓝色二极管激光器的CF405S/CF405。

　　CF405S/CF405M。Alexafluor405与*近使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm相配;光谱线的蓝色二极管激光器完美匹配。CF405S/CF405M荧光信号比Alexafluor405染料高1.7倍。

　　2.激发绿色(48nm处)

　　针对48nm氩气激光的绿色荧光染料，如CF488A.A.Alexaflur488.FAM.DyLight488.Cy2等;

　　所有配有488nm氩离子激光器的流式细胞仪器均可使用上述染料标记的抗体蛋白;流式细胞仪器的FL1通道检测;或可用于荧光显微技术;

　　CF488A**带电量减少与抗体耦合物的非特异性组合;在红色通道内溢流量小于AlexaFluor488;耐光性好;水溶性好，PH值不灵敏感;稳定性好，标记率活性染料。

　　在较宽的PH值范围内(PH4~10)AlexaFluor488保持稳定;

　　缺陷荧光强度容易受PH值影响，当PH值下降时，其荧光强度会减弱。

　　3.激发橙红色(543-555nm)

　　与543nm橙色荧光染料相匹配的CF543.Alexafluor546.ATTO550,Cy3,Dylight549,RITCTC;

　　CF?543荧光带明亮，耐光性好，水溶性好，保证了CF543染料与抗体的耦合物具有优异的水溶性，是该波段*亮的橙色荧光染料。例如，在相同的标记水平下，CF543标记的羊抗鼠IgG抗体的亮度是Alexafluor546标记的2~10倍。

　　匹配Cy3滤光片的橙色荧光染料，如CF555.Alexaflur555.Tetramethylrhodamine等;

　　4.红色(激发在568-594nm处)

　　568nm红色荧光染料，如CF568.AlexaFlur?568，ATTO565，R68nmRed等;

　　CF568染料luor568标记的抗体亮度相比，CF568染料具有**的耐光性能;

　　594.AlexaflurCF5?594，ATTO?594，DyLight?*亮的红色荧光染料，如594，TexasRed;

　　CF594比Alexafluor594明亮2~4倍，这是由于其高量子产量和优异的水溶性。与此同时，CF594对光非常稳定，因此可以理想地应用于严格条件下的应用，如共聚焦显微镜和单分子显像。

公司介绍：

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