Cy3-NHS Ester 标记抗体的使用方式

本文摘要：使用方法（用Cy3-NHS Ester 标记抗体）注意：可参考本方法进行多肽，蛋白或者其他分子的标记，需要根据具体的实验体系对合适的标记缓冲体系，样本浓度，染料浓度等参数做出合适的调整。1）用不含氨基···

使用方法（用Cy3-NHS Ester 标记抗体）

注意：可参考本方法进行多肽，蛋白或者其他分子的标记，需要根据具体的实验体系对合适的标记缓冲体系，样本浓度，染料浓度等参数做出合适的调整。

1）用不含氨基的合适的缓冲液（eg.100mM磷酸钠，150mM NaCl, pH7.5）溶解抗体使其浓度达到1-5mg/mL。【注】：如抗体中有残留Tris或 glycine 污染，则需透析或者脱盐到合适的缓冲液内。

2）使用前，用适量去离子水或者无水DMSO溶解Cy3-NHS，使其摩尔浓度为抗体摩尔浓度的400倍，例如，待标记的IgG浓度为1mg/mL（eg 6.7µM），则溶解后Cy3-NHS的浓度为2.7mM；如待标记的IgG浓度为2.5mg/mL，则溶解后Cy3-NHS的浓度为6.75mM；

3）向抗体中加入适量Cy3-NHS试剂，以达到预期的标记效率。【注】：当用Cy 3 NHS ester标记抗体或其他蛋白，亮度**的偶联物其染料/蛋白的比率为4-12，取决于特定的应用。过高比率会增加非特异性背景，丧失抗体特异性结合，导致聚集。建议根据应用优化标记比率。

4）室温孵育60min（或更长）；

5）利用合适缓冲液透析或脱盐柱去除未反应的试剂；

6）分别在280nm和550nm检测Cy3-抗体的吸光值；

7）测定Cy3标记效率（DOL）和标记浓度。

西安齐岳生物科技有限公司于2015年7月成立的西安一家从事材料科学，**化学，生命科学的科研试剂公司，从2015年发展至今，公司销售产品种类多达上百种，经营产品超十几万个，公司一直致力于为科研客户提供优质的产品，广泛的产品种类，有价格竞争力的科研试剂。

我们提供的荧光染料的目录:

Cyanine3 alkyne

Cyanine3 amine

Cyanine3 azide

Cyanine3 carboxylic acid

Cyanine3 DBCO

Cyanine3 hydrazide

Cyanine3 maleimide

Cyanine3 NHS ester

Cyanine3 tetrazine

Cyanine3.5 azide

Cyanine3.5 carboxylic acid

Cyanine3.5 DBCO

Cyanine3.5 NHS ester

Cyanine3B carboxylic acid

以上资料来自小编zhn2022.04.15

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